制品说明： Taq DNA 聚合酶（Klenow大片段）是一种热稳定性，持续性5→3 DNA 聚合酶。该酶蛋白分子量为94kDa，有5’→3’切口平移功能，无3→5校正功能。Taq DSC 2.0的配方中添加了一种新型核酸热启动添加剂，该设计保证了反应液的配制阶段和低温循环反应阶段暂不激活聚合酶。

用途： ·普通PCR和高通量PCR·引物延伸·微阵列基因芯片分析·DHPLC

来源： E.coli菌株，携带来自Thermophilic organism，Thermus Aquaticus YT-1的Taq DNA Polymerase基因。

酶贮存液： 20 mM Tris-HCl100 mM NaCl1.0 mM DTTl0.1 mM EDTA稳定剂50% 甘油pH 7.5，25°C保存

随酶提供： 10X PCR Buffer

10X PCR Buffer： 100 mM Tris-HCl500 mM KCl15 mM MgCl2pH 8.3，25℃保存

单位定义： 1单位是指在75℃条件下，30分钟内，能使10 nmol dNTPs合成掺入酸性不溶物所用的酶的量。

核酸污染检测 单链核酸外切酶活性： 在50μL反应体系中，10μL酶溶液和11,000 cpm放射性标记的单链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量小于5.0%。

双链核酸外切酶活性： 在50μL反应体系中，10μL酶溶液和5,000 cpm放射性标记的双链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量小于0.5%。

核酸内切酶活性： 在50μL反应体系中，10μL酶溶液与0.5μg pBR322 DNA作用，37℃孵育4小时，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。

E.coli 16s rDNA污染检测： 将5μL酶溶液进行变性，用16s RNA基因位点的寡聚核苷酸引物，进行TaqMan qPCR分析，检测E.coli基因组DNA污染物的存在。根据无模板对照的Ct值和标准曲线的拟和结果，本检测的下限可达到10个拷贝/样品。

PCR指南： Taq DNA聚合酶是最早，也是最广泛使用的PCR酶。Taq酶适用于小于5kb，复杂性不高的DNA片段的扩增，不需优化即可保持稳定的产率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶进行PCR设计时，请遵循以下指导：

质量控制分析 单位定义方法： 酶的单位活性是通过2倍连续稀释法测得的。用1X reaction buffer稀释该酶，加入到含10μg 小牛胸腺DNA，25 mM TAPS (pH 9.3)，50 mM KCl，2.0mM MgCl2，1 mM DTT，4mCi/mL 3H-dTTP和100 μM dNTPs的50μL反应体系中，酶的终浓度0.00008~0.01μg/μL。75℃条件下孵育10分钟，冰浴后进行1%的琼脂糖凝胶电泳，然后按照Sambrook and Russell的方法进行分析（Molecular Cloning, v3, 2001, pp. A8.25-A8.26）。

蛋白浓度测定（OD280）： 标准操作下，2.0μL蛋白样品，以2.0mg/ml BSA标准样（Pierce Cat#23209）为阳性对照，产品保存液为空白对照，经Nanodrop ND-1000 分光光度计测定OD280值。3次检测的平均值，根据吸光系数转换为11,380mg/mL，分子量为93,909Da。标准样品的允许误差为±5%。

SDS-PAGE（物理纯度检测） 4-20%的变性Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶，取2.0μL浓缩酶上样，两侧分别取分辨分子量范围较大的蛋白Marker和2.0μL 100倍稀释的待测酶上样。凝胶电泳后进行染色，并通过比较样品确定酶的纯度。本次实验的验收标准为，当浓缩样品中的污染物条带的总质量不超过稀释样品中的目的条带的蛋白质的质量时，可判定浓缩样品的浓度大于99%。

50μL 反应体系： 以下Mix在冰上配制，两者混匀，置于Thermal Cycler加热至94℃：

2X DNA/Oligonucleotide Master Mix1.0 μL 10 mM dNTPs1.0 μL 10 μM Forward Primer1.0 μL 10 μM Reverse Primer1.0 μL 500 ng/μL genomic DNA21 μL Type I Water

2X Enzyme/Buffer Master Mix5.0 μL 10X PCR Buffer I0.2 μL 5 U/μL Taq DSC 2.0 DNA Polymerase19.8 μL Type I Water

推荐贮存条件： -20℃